Étant donné que notre offre PAX continue de s'agrandir, nous sommes heureux de vous fournir une FAQ sur le PAX. De cette manière, vous pourrez tirer le meilleur parti de notre nouvelle méthode de dépistage des allergies.

Qu'est-ce que l'allergologie moléculaire ?

La allergologie moléculaire est une approche de pointe pour la détection des sensitisations, où des composants allergéniques individuels définis sont utilisés pour la détermination des IgE spécifiques à la place des extraits allergéniques traditionnellement utilisés. Les composants moléculaires sont des protéines purifiées ou recombinantes qui offrent un plus haut degré de standardisation que les extraits d'allergènes et permettent une identification plus précise des sensitisations aux IgE. Au cours de la dernière décennie, les tests d'allergologie moléculaire pour les humains ont été des outils puissants pour identifier les déclencheurs d'allergie, facilitant ainsi l'évaluation des risques et les décisions thérapeutiques.

Qu'est-ce que le PAX ?

Le PAX (Pet Allergy Xplorer) est le premier dosage sérologique quantitatif IgE macroarray multiplex commercial pour les vétérinaires. Il utilisera des cartouches contenant entre 250 et 300 spots comprenant à la fois des extraits (un tiers) et des composants moléculaires (c'est-à-dire des allergènes individuels, deux tiers). 

Comment les allergènes ont-ils été sélectionnés pour le PAX ?

Le PAX est dérivé de l'ALEX2 utilisé pour les humains. Nous avons d'abord éliminé tous les extraits et composants (c'est-à-dire, les allergènes moléculaires) qui étaient considérés comme non pertinents pour les animaux de compagnie (par exemple, ceux du kiwi, de la crevette, de la pêche, etc.). Comme l'ALEX2 contient peu d'extraits, nous avons ensuite ajouté ceux qui sont connus pour être importants pour les chiens, par exemple ceux de l'acarien Dermatophagoides farinae et de l'acarien Tyrophagus putrescentiae.

Étant donné qu'il existe des caractéristiques uniques qui font d'une protéine un allergène, nous avons conservé tous les composants de l'ALEX2 qui seraient probablement ciblés par les IgE animales.

Enfin, nous avons ajouté tous les composants connus pour être des allergènes pour les animaux, qui étaient absents de l'ALEX2 pour les humains. Après avoir testé plus de 1 000 sérums de chiens d'Europe, nous avons constaté que presque tous les extraits et composants avaient produit une détection positive des IgE spécifiques dans une proportion variable de chiens, confirmant ainsi que l'approche de sélection des allergènes était valide. Nextmune ajustera la nature des extraits et composants présents sur la cartouche au fil du temps, de sorte que les allergènes non réactifs ou peu réactifs seront supprimés. D'autre part, les scientifiques de Nextmune travailleront à caractériser l'"allergome" des chiens, des chats et des chevaux, de manière à ajouter régulièrement de nouveaux composants importants aux cartouches.

Y a-t-il une interférence de l'ictère, de la lipémie et de l'hémolyse ?

Un échantillon de sérum contenant de l'IgE spécifique aux allergènes à différentes concentrations a été enrichi en bilirubine, triglycérides ou hémoglobine à des concentrations de 2,5, 150 et 15 mg/dL, respectivement. Toutes les valeurs d'IgE spécifiques étaient dans les 25 % de celles du sérum sans enrichissement, et le ratio moyen du sérum enrichi par rapport à celui sans enrichissement variait entre 96 et 100 %. En résumé : il n'y a pas d'influence pertinente de l'ictère, de la lipémie ou de l'hémolyse sur les résultats du PAX.

Quels sont les CCD et où les trouve-t-on ?

La plupart des allergènes sont des glycoprotéines, ce qui signifie que certains acides aminés ont une chaîne de glucides (sucre). Les allergènes provenant de plantes (y compris les aliments à base de plantes), de venins d'insectes (abeilles) et de nématodes (vers) ont des chaînes de glucides différentes de celles des mammifères. Par conséquent, ces chaînes peuvent être reconnues par les IgE des humains et des animaux. Malheureusement, comme les sucres sont partagés entre les allergènes, ils peuvent provoquer des réactions croisées, c'est pourquoi on les appelle CCD, ou déterminants croisés de glucides.

Comment les CCD sont-ils impliqués dans les allergies ?

Pendant une réaction allergique, des IgE sont produites contre les chaînes de glucides ainsi que contre les protéines de l'allergène. Des études ont confirmé que cela se produit chez 30 % des humains, des chiens et des chats. Les IgE dirigées contre les chaînes de glucides CCD ne semblent pas avoir de pertinence clinique.

Pourquoi est-il important de bloquer les CCD ?

Bloquer les CCD signifie que la spécificité du test sérologique est améliorée. Des preuves montrent que la corrélation avec les résultats des tests intradermiques est également améliorée.

Les déterminants croisés réactifs aux hydrates de carbone (CCD) sont-ils bloqués DANS PAX ?

Chaque sérum d'animal testé est dilué dans un tampon contenant un mélange exclusif de protéines contenant différents types de CCD. Le PAX est également le premier test sérologique vétérinaire à avoir incorporé des détecteurs de CCD sur chaque cartouche pour vérifier l'efficacité du blocage des CCD. 

Quel réactif anti-IgE est utilisé dans le PAX ?

Pour le test canin, le PAX utilise l'anticorps monoclonal anti-IgE du chien 5.91, qui a été produit dans les années 1990 par le Professeur Bruce Hammerberg de la NC State University College of Veterinary Medicine. Cet anticorps reconnaît un épitope dans le segment Ce2 du fragment Fc de l'IgE canine. L'épitope est distinct des régions de l'IgE qui se lient aux récepteurs IgE à haute et basse affinité, assurant ainsi qu'il n'y a pas d'interférence des récepteurs IgE solubles naturellement présents chez les chiens allergiques. Il est important de noter que la séquence de l'épitope reconnu sur l'IgE du chien est complètement différente de celle présente sur l'IgM, l'IgA et les quatre sous-classes différentes d'IgG (IgG1 à IgG4) chez le chien. En fait, nous avons vérifié, à la fois avec un ELISA standard et le PAX, que l'anticorps 5.91 ne se lie pas à l'IgG canine. Des travaux sont en cours pour identifier le meilleur anticorps contre l'IgE féline et équine pour les inclure dans le PAX. En résumé, l'anticorps monoclonal anti-IgE 5.91 est spécifiquement unique pour l'IgE du chien. Un anticorps différent sera utilisé pour les chats et les chevaux.

Quelle est la précision du test ?

La précision a été déterminée dans deux conditions différentes : Pour la variation lot par lot des cartouches, deux lots différents ont été comparés en utilisant 54 combinaisons allergène/échantillon couvrant 44 allergènes. Pour les valeurs d'IgE spécifiques inférieures à 400 ng/mL, le coefficient de variation intra-test était de 3,0 % et le coefficient inter-test était de 7,1 %. Pour les valeurs supérieures à 400 ng/mL, ces CV% étaient de 2,0 % et 5,2 %, respectivement. Pour la détermination de la reproductibilité, trois échantillons de sérum canin ont été testés en double dans cinq séries différentes. Comme mentionné précédemment, pour les valeurs d'IgE inférieures, les CV intra-test et inter-test étaient de 6,2 % et 8,2 %, respectivement, et pour les valeurs plus élevées, elles étaient de 2,7 % et 7,0 %, respectivement. En résumé : la précision du PAX est excellente, avec des résultats hautement reproductibles.

Pourquoi obtient-on davantage de résultats négatifs lorsque j'envoie des sérums canins testés avec le PAX par rapport à d'autres technologies plus anciennes ?

Pour mieux répondre à cette question, examinons les résultats du PAX recueillis jusqu'à présent en 2023 auprès de plus de 25 000 chiens.

En Europe (11 196 sérums), les pourcentages de chiens ayant au moins une réaction positive variaient en fonction du laboratoire de test (Espagne, Pays-Bas et Royaume-Uni) et du mois de test, entre 83 % (Espagne, avril) et 96 % (Royaume-Uni, juin). Si l'on ne considérait que le pourcentage de chiens pouvant être candidats à l'immunothérapie (c'est-à-dire en excluant les allergènes alimentaires, les venins d'insectes et l'allergène Cte f 1 de la salive de puce), les pourcentages varieraient entre 51 % (Royaume-Uni, avril) et 88 % (Royaume-Uni, juin ; Pays-Bas, avril).

Aux États-Unis, le pourcentage parmi les 14 243 chiens ayant au moins une IgE spécifique détectable avec le PAX est resté assez stable pendant la majeure partie de l'hiver et du printemps (84-87 %), pour augmenter en juillet (88 %) et en août (95 %). Parmi eux, le pourcentage de chiens potentiellement traitables par immunothérapie a varié, passant d'un minimum de 70 % en janvier à une augmentation chaque mois pour atteindre 91 % en août.

Bien que certains vétérinaires puissent occasionnellement recevoir une série de tests négatifs, il ne s'agit pas d'une situation généralisée, car les chiffres ci-dessus se situent largement dans la fourchette de ce qui serait attendu d'après la littérature. Il convient de rappeler que certains chiens présentent des symptômes prurigineux similaires à ceux de la dermatite atopique (DA) qui ne sont pas dus à des allergies, tandis que d'autres ont une DA avec un mécanisme de lésion qui ne semble pas impliquer les IgE. En effet, la prétendue "dermatite similaire à l'atopie" représentait environ 15 % des chiens présentant une distribution de lésions et des symptômes prurigineux typiques de la DA, mais avec des tests intradermiques et sérologiques négatifs dans une étude récente (Botoni, Vet Dermatol 2019).

Pourquoi y a-t-il une telle variation ?

La réponse est simple : ces différences sont dues à l'exposition saisonnière variable au pollen. Examinons les États-Unis, pour lesquels nous disposons de données PAX depuis janvier 2023. En hiver, le taux de séropositivité pour au moins un type de pollen était d'environ 40 %. Ce taux variait entre 48 % et 64 % au printemps, et en été, il atteignait 86 % en août. De même, le nombre d'allergènes pouvant être inclus dans l'immunothérapie augmentait régulièrement : environ 4 en hiver, 5 au printemps et 10 en août.

En Europe, nous avons observé des variations similaires de positivité et de négativité face aux allergènes du pollen. Par exemple, dans un laboratoire néerlandais, le taux de positivité pour Fag s 1, l'allergène PR-10 du Fagus sylvatica (hêtre commun), était de 57 % en mars, de 45 % en avril, pour ensuite descendre à environ 10-15 %. En revanche, en raison d'une période de pollinisation plus tardive, le pic de sensibilisation à Fag s 1 au Royaume-Uni était en mai, pour ensuite diminuer lentement. De même et comme prévu, la sensibilisation aux pollens d'herbe était maximale en juillet dans les laboratoires néerlandais et du Royaume-Uni. Il ne faut pas seulement tenir compte de la période de pollinisation, mais il est probable que les facteurs météorologiques influencent également la libération du pollen. Un excellent exemple est ce qui a été observé dans le laboratoire PAX espagnol, qui teste principalement des sérums de chiens vivant dans les pays méditerranéens et en France. Cet été, le taux de séropositivité en IgE pour les pollens d'herbe et d'herbes folles a été nettement inférieur à ce qui était attendu, probablement en raison de la vague de chaleur qui a touché cette partie de l'Europe en juillet et en août.

Pourquoi de telles fluctuations n'avaient-elles pas été observées auparavant ?

Il semble qu'il n'y ait qu'un seul article (Bjelland, Acta Vet Scand 2014) qui ait documenté une telle variation. Chez les chiens norvégiens testés avec le test Allercept de Heska, le taux de séropositivité aux allergènes était plus élevé en été et en automne (environ 87 %) qu'en hiver et au printemps (79 %). La différence saisonnière était plus marquée pour les allergènes du pollen, avec un faible taux de sensibilisation de 39 % en hiver et de 50 % en été.

Il existe certains tests sérologiques où cette différence saisonnière pourrait ne pas être apparente. La principale explication réside probablement dans un blocage insuffisant des IgE qui reconnaissent les glucides à réactivité croisée liés aux allergènes végétaux (c'est-à-dire les "IgE-CCD"), ce qui conduit à des résultats de test faux positifs. Alors que la plupart des laboratoires incluent désormais des étapes de blocage des IgE-CCD, le PAX de Nextmune est le seul à détecter l'efficacité d'un tel blocage. Si le premier blocage est jugé insuffisant, un second blocage est effectué, ce qui pourrait conduire à une négativisation complète de la réactivité aux extraits de pollen. De plus, presque tous les composants allergéniques du pollen dans le PAX sont des protéines recombinantes exemptes d'IgE-CCD.

Pour résumer, le taux de positivité du PAX est similaire à celui d'autres résultats de tests précédemment signalés, mais la saison de réalisation des tests a une forte influence sur le taux de sensibilisation global et sur celui vis-à-vis des pollens. De plus, une stratégie unique de blocage des IgE-CCD élimine probablement les IgE-CCD, ce qui pourrait entraîner une réactivité faussement positive des IgE vis-à-vis des pollens et des allergènes alimentaires végétaux dans d'autres tests sérologiques.

Que faire pour limiter les résultats négatifs du PAX ?

Voici notre stratégie recommandée :

1. Envoyez le sérum environ un mois après le début de la saison où le chien est connu pour présenter des poussées.

2. Effectuez le test lorsque le chien est bien dans une poussée, de sorte que les cellules T aient le temps d'activer la sécrétion d'IgE par les cellules B.

Enfin, rappelez-vous que certains chiens peuvent présenter une dermatite similaire à l'atopie, pour laquelle les tests de sensibilisation cutanée et sérologique seront négatifs.