Da unser PAX-Angebot weiterhin wächst, freuen wir uns, Ihnen eine FAQ zu PAX anzubieten. Auf diese Weise können Sie das Beste aus unserer neuen Methode zur Allergietestung herausholen.

Was ist molekulare Allergologie?

Die molekulare Allergologie ist ein hochmoderner Ansatz zur Erkennung von Sensibilisierungen, bei dem definierte einzelne Allergenkomponenten zur Bestimmung von spezifischem IgE anstelle traditioneller Allergenextrakte verwendet werden. Die molekularen Bestandteile sind gereinigte oder rekombinante Proteine, die eine höhere Standardisierung bieten als Allergenextrakte und eine präzisere Identifizierung von IgE-Sensibilisierungen ermöglichen. In den vergangenen zehn Jahren haben molekulare Allergologie-Tests für Menschen leistungsstarke Werkzeuge dargestellt, die dazu beigetragen haben, Allergieauslöser genau zu identifizieren und somit die Risikobewertung und Therapieentscheidungen zu erleichtern.

Was ist der PAX?

Der PAX (Pet Allergy Xplorer) ist der erste kommerzielle veterinärmedizinische Multiplex-Macroarray-quantitative IgE-Serologietest. Er verwendet Kartuschen mit 250 bis 300 Spots, die sowohl Extrakte (ein Drittel) als auch molekulare Bestandteile (d.h. einzelne Allergene, zwei Drittel) enthalten.

Wie wurden die Allergene für den PAX ausgewählt?

Der PAX leitet sich von dem für Menschen verwendeten ALEX2 ab. Zuerst haben wir alle Extrakte und Bestandteile (d.h. die molekularen Allergene), die für Haustiere als irrelevant erachtet wurden (z.B.  Kiwi, Garnele, Pfirsich, etc.), eliminiert. Da der ALEX2 nur wenige Extrakte enthält, haben wir dann diese hinzugefügt, die für Hunde wichtig sind. Beispielsweise die der Hausstaubmilbe Dermatophagoides farinae und der Vorratsmilbe Tyrophagus putrescentiae.

Da es einzigartige Merkmale gibt, die ein Protein zu einem Allergen machen, haben wir alle Komponenten aus dem ALEX2 beibehalten, die wahrscheinlich von tierischem IgE angegriffen werden würden.

Schließlich haben wir alle Komponenten hinzugefügt, die als Allergene für Tiere bekannt sind und im ALEX2 für Menschen fehlten. Nachdem mehr als 1.000 Hundeseren aus Europa getestet wurden, konnten wir feststellen, dass fast alle Extrakte und Komponenten eine positive spezifische IgE-Detektion in unterschiedlichem Maße bei Hunden ergeben haben. Dies hat die Validität des Ansatzes zur Allergenauswahl bestätigt. Nextmune wird im Laufe der Zeit die Art der Extrakte und Komponenten auf der Kartusche anpassen, so dass Allergene, die nicht oder schlecht reaktiv sind, entfernt werden. Andererseits werden die Wissenschaftler von Nextmune daran arbeiten, das "Allergom" von Hunden, Katzen und Pferden zu charakterisieren, damit regelmäßig wichtige neue Komponenten zu den Kartuschen hinzugefügt werden können.

Gibt es Interferenzen durch Ikterus, Lipämie und Hämolyse?

Eine Serumprobe, die allergenspezifisches IgE in unterschiedlichen Konzentrationen enthält, wurde mit Bilirubin, Triglyceriden oder Hämoglobin in Konzentrationen von jeweils 2,5, 150 und 15 mg/dL versetzt. Alle spezifischen IgE-Werte lagen innerhalb von 25% derjenigen des Serums ohne Zusatz. Das durchschnittliche Verhältnis des zugesetzten Serums zu dem ohne Zusatz variierte zwischen 96 und 100%.
Fazit: Es gibt keine relevanten Einflüsse von Ikterus, Lipämie oder Hämolyse auf die PAX-Ergebnisse.

Was sind CCDs und wo findet man sie?

Die meisten Allergene sind Glykoproteine. Das bedeutet, dass einige Aminosäuren eine Kohlenhydratkette (Zucker) haben. Die Allergene aus Pflanzen (einschließlich pflanzlicher Nahrungsmittel), Insektengiften (Bienen) und Nematoden (Würmer) haben Kohlenhydratketten, die sich von denen der Säugetiere unterscheiden. Als Ergebnis können diese Ketten von IgE aus Menschen und Tieren erkannt werden. Leider können die Zucker, da sie von verschiedenen Allergenen geteilt werden, Kreuzreaktionen auslösen, weshalb sie CCDs oder kreuzreaktive Kohlenhydratdeterminanten genannt werden.

Wie sind CCDs in Allergien involviert?

Während einer allergischen Reaktion wird IgE sowohl gegen die Kohlenhydratketten als auch gegen die Proteine des Allergens produziert. Studien haben bestätigt, dass dies bei 30% der Menschen, Hunde und Katzen auftritt. Das IgE gegen CCD-Ketten scheint klinisch nicht relevant zu sein.

Warum ist es wichtig, CCDs zu blockieren?

Das Blockieren von CCDs bedeutet, dass die Spezifität des serologischen Tests verbessert wird. Die Evidenz zeigt, dass die Korrelation mit den Ergebnissen der intradermalen Tests ebenfalls verbessert wird.

Werden kreuzreaktive Kohlenhydratdeterminanten (CCD) im PAX blockiert?

Jede getestete Tierprobe wird in einem Puffer verdünnt, der eine proprietäre Mischung von Proteinen enthält, die verschiedene Arten von CCDs enthalten. Der PAX ist auch der erste veterinärserologische Test, der CCD-Detektoren in jede Kartusche eingebaut hat, um die Effizienz der CCD-Blockierung zu überprüfen. 

Welcher Anti-IgE-Reagenz wird im PAX verwendet?

Für den Hundetest verwendet der PAX das Anti-Hund-IgE-Monoklonal 5.91, das in den 1990er Jahren von Prof. Bruce Hammerberg an der NC State University College of Veterinary Medicine entwickelt wurde. Dieser Antikörper erkennt ein Epitop im Ce2-Segment des Fc-Fragments des IgE beim Hund. Das Epitop unterscheidet sich von den IgE-Regionen, die an die Hoch- und Niedrigaffinitäts-IgE-Rezeptoren binden. Dadurch wird sichergestellt, dass keine Beeinflussung durch die löslichen IgE-Rezeptoren erfolgt, die in allergischen Hunden natürlich vorhanden sind. Wichtig ist, dass die Sequenz des auf dem Hund-IgE erkannten Epitops völlig unterschiedlich ist von derjenigen, die bei Hund-IgM, IgA und den vier verschiedenen IgG-Subklassen (IgG1 bis IgG4) vorliegt. Tatsächlich haben wir sowohl mit dem Standard-ELISA als auch mit dem PAX bestätigt, dass der 5.91-Antikörper nicht an das Hund-IgG bindet. Die Arbeit zur Identifizierung des besten Antikörpers gegen IgE beim Katze und Pferd für deren Aufnahme in den PAX ist im Gange. Fazit: Der 5.91 monoklonale Anti-IgE ist eindeutig spezifisch für das Hund-IgE. Für Katzen und Pferde wird ein anderer Antikörper verwendet.

Warum gibt es mehr negative Ergebnisse, wenn ich Hundeseren zur Untersuchung mit dem PAX im Vergleich zu älteren Technologien schicke?

Um diese Frage besser beantworten zu können, werfen wir einen Blick auf die bisher im Jahr 2023 von mehr als 25.000 Hunden gesammelten PAX-Ergebnisse.

In Europa (11.196 Seren) variierten die Prozentsätze der Hunde mit mindestens einem positiven Ergebnis je nach Prüflabor (Spanien, Niederlande und das Vereinigte Königreich) und dem Prüfmonat zwischen 83% (Spanien, April) und 96% (Vereinigtes Königreich, Juni). Wenn man nur den Prozentsatz der Hunde in Betracht zieht, die Kandidaten für eine Immuntherapie wären (das heißt, unter Ausschluss von Nahrungsmittelallergenen, Insektengiften und Flohspeichelallergen Cte f 1), variieren die Prozentsätze zwischen 51% (Vereinigtes Königreich, April) und 88% (Vereinigtes Königreich, Juni; NL, April).

In den USA blieb der Prozentsatz unter den 14.243 Hunden mit mindestens einer nachweisbaren spezifischen IgE, die mit dem PAX getestet wurden, während des größten Teils des Winters und Frühlings recht stabil (84-87%) und stieg im Juli (88%) und August (95%). Unter diesen variierte der Prozentsatz der Hunde, die potenziell mit Immuntherapie behandelt werden könnten, von einem Tiefststand von 70% im Januar und stieg jeden Monat an, um im August 91% zu erreichen.

Während einige Tierärzte gelegentlich eine Reihe negativer Tests erhalten könnten, handelt es sich nicht um eine weit verbreitete Situation, da die oben genannten Zahlen im Rahmen dessen liegen, was in der Literatur erwartet wird. Es ist wichtig zu bedenken, dass einige Hunde juckende Hautzustände haben können, die der atopischen Dermatitis (AD) ähneln, aber nicht allergisch sind, während andere AD mit einem wahrscheinlich nicht auf IgE basierenden Läsionsmechanismus haben. Tatsächlich repräsentierte die sogenannte "atopieähnliche Dermatitis" in einer kürzlich durchgeführten Studie (Botoni, Vet Dermatol 2019) etwa 15% der Hunde mit einer für die AD typischen Läsionsverteilung und Juckreiz, jedoch negativen intradermalen und serologischen Tests.

Warum gibt es solche Schwankungen?

Die Antwort ist einfach: Diese Unterschiede sind auf die variable saisonale Pollenexposition zurückzuführen. Sehen wir uns die Daten des PAX für die USA an, für die wir Daten seit Januar 2023 haben. Im Winter lag die Seropositivitätsrate für mindestens einen Pollen bei etwa 40%. Diese Rate schwankte im Frühling zwischen 48 und 64% und stieg im Sommer im August auf 86%. Ebenso gab es einen stetigen Anstieg der Anzahl der Allergene, die für die Immuntherapie in Frage kamen: etwa 4 im Winter, 5 im Frühling und 10 im August.

In Europa haben wir ähnliche Schwankungen bei der Positivitätsrate für Pollenallergene erlebt. Zum Beispiel betrug die Positivitätsrate für Fag s 1, dem PR-10 Allergen aus der Rotbuche (Fagus sylvatica), in einem niederländischen Labor 57% im März, 45% im April und fiel danach auf etwa 10-15%. Im Gegensatz dazu war der Höhepunkt der Sensibilisierung für Fag s 1 im Vereinigten Königreich im Mai aufgrund einer späteren Pollenzeit und fiel danach langsam ab. Ebenso und wie erwartet, war die Sensibilisierung gegen Gräserpollen im Juli in den niederländischen und britischen Laboren am höchsten. Nicht nur die Pollensaison muss berücksichtigt werden, sondern auch meteorologische Faktoren beeinflussen wahrscheinlich die Freisetzung von Pollen. Ein gutes Beispiel ist das, was im spanischen PAX-Labor beobachtet wurde, das hauptsächlich Seren von Hunden aus Mittelmeerländern und Frankreich testet. Diesen Sommer war der IgE-Seropositivitätspegel für Gras- und Unkrautpollen deutlich niedriger als erwartet. Grund hierfür war wahrscheinlich die Hitzewelle, die diese Regionen im Juli und August heimgesucht hat.

Warum wurden solche Schwankungen zuvor nicht beobachtet?

Es scheint nur eine Studie (Bjelland, Acta Vet Scand 2014) zu geben, die solche Schwankungen dokumentiert hat. Bei norwegischen Hunden, die mit Heskas Allercept-Test getestet wurden, war die Seropositivitätsrate für Allergene im Sommer und Herbst (ca. 87%) höher als im Winter und Frühling (79%). Der saisonale Unterschied war bei Pollenallergenen größer, mit einer niedrigen Sensibilisierungsrate von 39% im Winter und 50% im Sommer.

Es gibt einige serologische Tests, bei denen dieser saisonale Unterschied möglicherweise nicht offensichtlich ist. Die Haupterklärung dafür liegt wahrscheinlich in einer unzureichenden Blockierung von IgE, die pflanzengebundene kreuzreagierende Kohlenhydrate erkennt (d.h. "CCD-IgE"), was zu falsch positiven Testergebnissen führt. Während die meisten Labore jetzt Schritte zur Blockierung von CCD-IgE einschließen, ist der PAX von Nextmune der Einzige, der die Effizienz einer solchen Blockierung erkennt. Wenn die erste Blockade als unzureichend erachtet wird, wird eine zweite Blockade durchgeführt, die die Reaktivität auf Pollenextrakte möglicherweise vollständig negiert. Darüber hinaus bestehen fast alle Pollenallergenkomponenten im PAX aus rekombinanten Proteinen, die keine CCDs enthalten.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Positivitätsrate des PAX ähnlich hoch ist wie bei anderen zuvor berichteten Testergebnissen, dass aber die Jahreszeit, in der der Test durchgeführt wird, einen starken Einfluss auf die Gesamtsensibilisierungsrate und die Sensibilisierungsrate für Pollen hat. Außerdem wird durch eine einzigartige CCD-Blockierungsstrategie wahrscheinlich CCD-IgE eliminiert, was bei anderen serologischen Tests zu einer falsch-positiven IgE-Reaktivität auf Pollen und pflanzliche Nahrungsmittelallergene führen könnte.

Was kann getan werden, um negative PAX-Ergebnisse zu begrenzen?

Hier ist unsere empfohlene Strategie:

1. Reichen Sie das Serum etwa einen Monat nach Beginn der Saison ein, in der bekannt ist, dass der Hund Schübe hat.
2. Führen Sie den Test durch, wenn sich der Hund mitten in einem Schub befindet, damit die T-Zellen Zeit haben, die IgE-Sekretion durch B-Zellen zu aktivieren.

Denken Sie schließlich daran, dass es Hunde mit einer atopieähnlichen Dermatitis geben kann, bei denen Haut- und serologische Sensibilisierungstests negativ ausfallen.