Cytologi är det vanligaste och mest informativa diagnostiska verktyget inom dermatologi, för att uppnå en snabb, bekväm och billig indikation på om en patient har en hudinfektion, vilken typ av infektioner (jäst vs. bakterier) och vilken typ av inflammatoriska celler som finns.

Den här bloggen fokuserar på provtagningstekniker och identifiering av infektiösa organismer, inflammatoriska celler, förändringar i keratinocyternas morfologi och artefakter som kan förekomma. Den omfattar inte provtagningsteknik från noduli eller kutana neoplasmer, eftersom tolkningen av dessa kräver ytterligare expertis och specialutbildning och ligger utanför ramen för denna blogg.

För att utföra öroncytologi behövs ingen specialutrustning förutom bomullspinnar, objektglas, färgningsvätska och ett bra mikroskop. Detsamma gäller för hudcytologi, med tillägg av tejp.

Cytologi utförs normalt från hudlesioner som pustler (fig 1), kanter av collarettes (fig 2), plack, skorpor, sår, icke-läkande sår eller fistlar, liksom hudveck och interdigitala utrymmen. Det kan bidra till att bekräfta förekomsten och utvärdera typen av infektion/inflammatorisk reaktion och akantolys. Det hjälper slutligen till att avgöra om en svabb för odling och känslighet, eller ytterligare diagnostiska tester behövs.

De cytologiska fynden är också ovärderliga för att bestämma vilken behandling som ska användas och för att övervaka svaret på behandlingen. Den teknik som väljs beror på platsen för provet:

Avtryck på glasskiva

Avtryck kan tas från alla exsudativa lesioner. En pustel provtas genom att dess topp öppnas med en fin nål innan några avtryck tas direkt på en glasskiva. Genom att flytta objektglaset en aning före varje avtryck undviks en alltför tjock ansamling av material. Provtagning i kanten av en collarette kan ge fler mikroorganismer än provtagning i mitten av lesionen. Om det finns en skorpa är det bättre att ta prover på hudytan eller området under skorpan. Avtryck av undersidan av en skorpa kan vara diagnostiskt värdefulla, särskilt vid misstanke om pemphigus foliaceus. Material som kommer ut ur en fistel ska samlas in genom att man trycker på huden runt fisteln eller för in en bomullspinne i fisteln.
Vid direktavtryck ska man vara försiktig så att man undviker cellskador som gör att cytologin inte kan tolkas. Om det inte är möjligt att ta ett direkt avtryck kan material överföras från en lesion till objektglaset med hjälp av en bomullstops.

Acetatremsor

Transparent acetattejp används för att få ett prov från torra lesioner som inte fäster lätt på ett objektglas, eller för att få prov från områden (hudveck och interdigitala utrymmen) som är svåra att komma åt med ett objektglas.

En tejpremsa som är cirka 50 procent längre än ett objektglas används och mitten av den klibbiga sidan av tejpen trycks fast mot området flera gånger för att plocka upp epidermalt skräp och få prover. Varje ände av tejpen fästs sedan i ena änden av ett objektglas, så att det bildas en ögla, och färgas. Genom att sedan linda tejpen runt objektglasets båda ändar hålls det stadigt på plats och underlättar mikroskopisk undersökning under oljeimmersion.
Med prover som pus lufttorkas objektglaset först och färgas sedan. Den enklaste färgen att använda internt är en kommersiell modifierad Wright-färg som Diff Quik. Observera att bakterier och jästsvampar alltid färgas blå om Diff-Quik-färgning används. På samma sätt färgas prover från acetattejpremsor med Diff Quik, men bara med de röda och blå färgämnena. Användning av alkoholfixativ skulle lösa upp tejpens lim.
Under den mikroskopiska undersökningen är det viktigt att hålla ljuskondensorn uppe när man undersöker ett cytologiprov.

Cytologiska preparat bör först skannas under låg effekt för ett område med jämnt fördelade celler, ett lager tjockt. Därefter rekommenderas användning av ett x100 oljeimmersionsobjektiv för detaljerad undersökning av cellmorfologin.
De vanligaste typerna av organismer som påträffas vid hudcytologi är jäst och bakterier. Den vanligaste jästorganismen i prover från hundar och katter är Malassezia pachydermatis, även om Candida spp också kan hittas på huden. Det finns ett stort antal olika bakterier som kan hittas i hudcytologi. Staphylococcus spp. är dock den vanligaste bakterien som isoleras från hudinfektioner hos hundar och katter. En annan bakterie som ibland påträffas är Simonsiella spp.

.

Dessa är ofarliga, mycket stora trådformiga gramnegativa saprofyter som lever i munhålan hos en mängd olika varmblodiga ryggradsdjur. De finns vanligtvis i litet antal och är inte intracellulära (även om de kan vara vidhäftande till keratinocyter). Dessa organismer är inte kända för att vara patogena, men när de hittas på områden som inte är associerade med munhålan, t.ex. de interdigitala utrymmena, är deras närvaro sannolikt förknippad med klåda.
Dermatofyter och andra svamporganismer kan också hittas vid cytologi. Dermatofytsporer framträder ofta som runda sfärer som är ungefär dubbelt så stora som kockoida bakterier. Identifiering av inflammatoriska celler på cytologin kan ge en ledtråd till lesionens patogenes. Förekomst av degenererade neutrofiler med intracellulära bakterier är oftast ett tecken på pyodermi. Om välbevarade neutrofiler ses kan tillstånd som pemphigus foliaceus övervägas. Ibland kan den kraft som krävs för att få ett exfoliativt prov spräcka eventuella inflammatoriska celler, särskilt neutrofiler. När detta inträffar sprids ofta kärnmaterialet från dessa celler ut på objektglaset och kan identifieras med låg styrka. Förekomst av eosinofiler indikerar inflammation sekundärt till parasiter, överkänslighetsreaktioner eller eosinofilt granulom hos katter.

Andra vanliga inflammatoriska celler är neutrofiler och neutrofiler.

Andra vanliga inflammatoriska celler är makrofager och lymfocyter. Dessa ses vanligtvis från mer kroniska eller djupare lesioner. Makrofager är effektiva fagocyterande celler och innehåller ofta utarmade neutrofiler, röda blodkroppar, bakterier, svampelement och till och med intracellulära parasiter som Leishmania spp. och andra organismer.

Epitelceller

Epitelceller som normalt påträffas vid exfoliativ cytologi är korneocyter (icke-nukleära keratinocyter). Keratinocyter är ett normalt fynd, men i sjuk hud har keratinocytmorfologi ofta ett diagnostiskt värde. Klyvda keratinocyter hittas normalt i prover från slemhinnor eller när hudytan skrapats före cytologin. När de hittas i prover från hudytan tyder det på onormal omsättning av epitelskikten eller erosion av de förhornade lagren. Dessa keratinocyter innehåller ofta keratohyalina granula och ska inte förväxlas med bakterier. I stället för att se ut som platta, skarpt vinklade stora celler kan vissa keratinocyter eller korneocyter se rullade eller mer spindelformade ut vid rutincytologi på grund av att de viks och rullas under provtagnings- och fixeringsprocessen. Akantolytiska celler är keratinocyter i det nedre skiktet som har förlorat sin vidhäftning till närliggande keratinocyter. De är vanligast förekommande i pemphigus foliaceus-lesioner, men kan också ses vid djup furunkulos sekundärt till tillstånd som demodikos och dermatofytos. Akantholytiska celler är stora, runda celler med en central cellkärna. De färgas ofta med en mörkblå periferi som kan tyda på antikroppsbeläggning. I fall av pemfigus återfinns de ofta i flak och bland välbevarade neutrofiler och/eller eosinofiler. Vid demodikos eller dermatofytos är de akantolytiska cellerna vanligtvis glesa och återfinns bland degenererade inflammatoriska celler.

Artefakter

Artiklar förekommer ofta på cytologislides. De kan ofta förväxlas med signifikanta fynd. Många exsudativa prover har en markant proteinhaltig bakgrund, som ofta ser ljuslila eller rosa ut med fina mörkare färgningskorn som kan misstas för små bakterier. Melaninkorn kan också misstas för stavformade bakterier som Pseudomonas spp. Melaninkorn hittas dock oftast i och runt keratinocyter, färgar en eldfast brun till svart färg och är mycket jämna i storlek.
Det är inte ovanligt under vår- och sommarmånaderna att hitta vegetabiliska pollen, särskilt i prover som tas från interdigitala utrymmen. De finns i många olika former och storlekar och förväxlas ofta med svampelement.

Slutsatser

Under en given månad på en dermatologisk mottagning tas cytologiska prover från cirka 80 procent av patienterna, vilket utgör cirka 10 till 20 procent av klinikens totala intäkter! Kutan cytologi är billig, mycket informativ och lätt att lära sig själv.

Genom att göra cytologi till en del av den dagliga verksamheten blir diagnostik och behandlingar bättre och ärendehanteringen omedelbart mer givande.