La cytologie est l'outil de diagnostic le plus courant dans la pratique de la dermatologie. Elle permet d'obtenir une indication rapide, pratique et peu coûteuse sur la présence ou non d'une infection cutanée chez un patient, sur le type d'infection (levure vs. bactérie) et sur le type de cellules inflammatoires présentes.
Ce blog se concentre sur les techniques de prélèvement d'échantillons et l'identification des organismes infectieux, des cellules inflammatoires, des changements dans la morphologie des kératinocytes et des artefacts qui peuvent être rencontrés. Il n'aborde pas les techniques d'échantillonnage des nodules ou des néoplasmes cutanés, car leur interprétation nécessite une expertise supplémentaire et une formation spécialisée, et dépasse le cadre de ce blog.
La réalisation d'une cytologie auriculaire ne nécessite pas un équipement spécifique à part des écouvillons, des lames, un kit de coloration et un bon microscope. Il en est de même pour la cytologie cutanée, avec l'ajout de ruban adhésif.
La cytologie est normalement effectuée à partir de lésions cutanées comme les pustules (fig. 1), les bords des collerettes (fig. 2), les plaques, les croûtes, les ulcères, les plaies non cicatrisées ou les fistules, ainsi que des plis cutanés et espaces interdigitaux. Elle peut aider à confirmer la présence d'une infection, inflammation ou acantholyse. Elle aide éventuellement à décider si une culture, un test de sensibilité ou d'autres tests de diagnostic sont nécessaires.
Les résultats cytologiques sont également précieux pour déterminer le traitement à utiliser et surveiller la réponse au traitement. La technique de prélèvement dépend du site à échantillonner :
Des prélèvements peuvent être effectués sur n'importe quelle lésion exsudative. Une pustule est échantillonnée en ouvrant son sommet avec une aiguille fine avant que du matériel ne soit prélevé directement sur une lame de verre. En déplaçant légèrement la lame avant chaque prélèvement, on évite l'accumulation trop importante de matériel. L'échantillonnage du bord d'une collerette peut fournir plus de micro-organismes que l'échantillonnage du centre de la lésion. En présence d'une croûte, il est préférable d'échantillonner la surface de la peau ou la zone sous la croûte. Le prélèvement de la face inférieure d'une croûte peut avoir une valeur diagnostique, en particulier en cas de suspicion de pemphigus foliacé. Le matériel provenant d'une fistule doit être collecté en pressant la peau autour de la fistule ou en insérant un écouvillon à l'intérieur de la fistule.
Il faut veiller à ne pas endommager les cellules lors de prélèvements directs, ce qui rendrait la cytologie ininterprétable. Lorsqu'un prélèvement direct n'est pas possible, le matériel peut être transféré d'une lésion à la lame à l'aide d'un écouvillon.
Le ruban adhésif transparent est utilisé pour obtenir un échantillon de lésions sèches qui ne collent pas facilement à une lame de verre, ou pour obtenir des échantillons de zones (plis cutanés et espaces interdigitaux) difficiles d'accès avec une lame de verre.
Une bande de ruban adhésif environ 50 % plus longue qu'une lame de microscope est utilisée, et le milieu de la face collante est pressé fermement contre la zone à plusieurs reprises pour recueillir les débris épidermiques et obtenir du matériel. Chaque extrémité du ruban est ensuite fixée à une extrémité d'une lame de microscope, formant une boucle, et est colorée. On enroule ensuite le ruban autour des deux extrémités de la lame, en le maintenant fermement en position, pour faciliter l'examen microscopique avec immersion dans l'huile.
Pour les échantillons tels que le pus, la lame est d'abord séchée à l'air, puis colorée. La teinture la plus facile à utiliser est une teinture de Wright modifiée, comme le Diff Quik. Notez que les bactéries et les levures se colorent toujours en bleu avec le Diff-Quik. De même, les échantillons de bandes d'acétate sont colorés avec Diff Quik en utilisant uniquement les colorants rouge et bleu. L'utilisation du fixateur alcoolique dissoudrait la colle du ruban.
Il est important de maintenir le condenseur de lumière en position haute lors de l'examen d'un échantillon cytologique au microscope.
Les préparations cytologiques doivent être examinées méthodiquement. Les préparations cytologiques doivent d'abord être scannées à faible grossissement pour obtenir une zone de cellules uniformément réparties, d'une épaisseur d'une couche. L'utilisation d'un objectif à immersion d'huile x100 est ensuite recommandée pour l'examen détaillé de la morphologie cellulaire.
Les types d'organismes les plus couramment rencontrés en cytologie cutanée sont les levures et les bactéries. La levure la plus courante dans les échantillons prélevés sur les chiens et les chats est Malassezia pachydermatis, bien que Candida spp. puisse également se trouver sur la peau. La variété des bactéries que l'on peut trouver sur la cytologie cutanée est très grande. Cependant, Staphylococcus spp. est la bactérie la plus fréquemment isolée lors d'infections cutanées chez les chiens et les chats. Une autre bactérie occasionnellement rencontrée est Simonsiella spp.
Il existe également des saprophytes filamenteux Gram-négatifs longs et inoffensifs qui habitent la cavité buccale de divers vertébrés à sang chaud. Ils se trouvent généralement en petit nombre et ne sont pas intracellulaires (bien qu'ils puissent adhérer aux kératinocytes). Ces organismes ne sont pas connus pour être pathogènes ; cependant, lorsqu'ils sont trouvés dans des zones non associées à la cavité buccale, comme les espaces interdigitaux, leur présence est probablement liée au prurit.
Des dermatophytes et d'autres organismes fongiques peuvent également être trouvés en cytologie. Les spores de dermatophytes apparaissent souvent comme des sphères rondes d'une taille environ deux fois supérieure à celle des bactéries coccoïdes.
L'identification des cellules inflammatoires en cytologie peut donner une indication sur la pathogenèse de la lésion. La présence de neutrophiles dégénérés avec des bactéries intracellulaires indique le plus souvent une pyodermite. Si l'on observe des neutrophiles bien conservés, des pathologies telles que le pemphigus foliacé peuvent être envisagées. Parfois, la force nécessaire pour obtenir un prélèvement exfoliatif peut rompre les cellules inflammatoires présentes, notamment les neutrophiles. Lorsque cela se produit, le matériel nucléaire de ces cellules s'étale souvent sur la lame et peut être identifié à faible grossissement. La présence d'éosinophiles indique une inflammation secondaire à des parasites, à des réactions d'hypersensibilité ou un granulome éosinophilique chez le chat.
Les macrophages et les lymphocytes sont d'autres cellules inflammatoires courantes. Ces cellules sont généralement observées dans les lésions plus chroniques ou plus profondes. Les macrophages sont des cellules qui phagocytaires efficaces et contiennent souvent des neutrophiles dégénérés, des globules rouges, des bactéries, des éléments fongiques et même des parasites intracellulaires tels que Leishmania spp. ou autres.
Les cellules épithéliales normalement rencontrées en cytologie exfoliative sont les cornéocytes (kératinocytes anucléés). La présence de kératinocytes est normale ; cependant, la morphologie des kératinocytes d'une peau malade a souvent une valeur diagnostique. Les kératinocytes nucléés sont normalement trouvés dans les échantillons provenant des muqueuses ou lorsque la surface de la peau a été grattée avant la cytologie. Lorsqu'ils sont trouvés dans des échantillons de la surface de la peau, cela suggère un renouvellement anormal des couches épithéliales ou une érosion des couches cornées. Ces kératinocytes contiennent souvent des granules de kératohyaline et ne doivent pas être confondus avec des bactéries. Au lieu d'apparaître comme de grandes cellules plates fortement angulées, certains kératinocytes ou cornéocytes peuvent apparaître enroulés ou fusiformes lors de cytologie de routine en raison du pliage et de l'enroulement pendant le processus de prélèvement et de fixation. Les cellules acantholytiques sont des kératinocytes de couche inférieure qui ont perdu leur adhérence aux kératinocytes voisins. Elles se trouvent le plus souvent dans les lésions de pemphigus foliacé, mais peuvent également être observées dans les furonculoses profondes secondaires à des affections telles que la démodécie et la dermatophytose. Les cellules acantholytiques sont de grandes cellules rondes avec un noyau central. Elles se colorent souvent avec une périphérie bleu foncé qui peut indiquer la présence d'anticorps. Dans les cas de pemphigus, on les trouve souvent en "radeau" parmi les neutrophiles et/ou éosinophiles bien préservés. Dans les cas de démodécie ou de dermatophytose, les cellules acantholytiques sont généralement rares et se trouvent parmi les cellules inflammatoires dégénérées.
Des artefacts sont souvent observés sur les lames cytologiques. Ils peuvent souvent être confondus avec des résultats significatifs. De nombreux échantillons exsudatifs ont un fond protéique marqué, qui apparaît souvent de couleur rose ou violet clair avec des granules de coloration plus foncée pouvant être confondus avec de petites bactéries. Les granules de mélanine peuvent également être confondus avec des bactéries en forme de bâtonnets comme Pseudomonas spp. Toutefois, les granules de mélanine se trouvent le plus souvent dans et autour des kératinocytes, se colorent d'un brun à noir réfractaire et sont très uniformes en taille.
Il n'est pas rare de trouver au printemps et en été des pollens végétaux, surtout dans les échantillons prélevés sur les espaces interdigitaux. Ils se présentent sous différentes formes et tailles et sont souvent confondus avec des éléments fongiques.
Des échantillons cytologiques sont prélevés chez environ 80 % des patients présentés en consultation spécialisée de dermatologie, représentant environ 10 à 20 % du revenu total de la clinique ! La cytologie cutanée est peu coûteuse, très instructive et facilement réalisable.
En intégrant la cytologie à la pratique quotidienne, les diagnostics et les traitements deviennent plus efficaces.